对照组相比，漱口水处理组细胞微核率增加（P<0.05），分裂细胞数减少，分裂指数下降（P<0.05），表明漱口水对大蒜根尖细胞有遗传损伤作用。
关键词：漱口水;微核率;微核指数;有丝分裂指数
中图分类号：S633 文献标识码：A
文章编号：0439-8114（2019）15-0136-03
DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.15.032 开放科学（资源服务）标识码（OSID）：
Effects of mouthwash on genetic damage of root tip cells of garlic
LI Jun-chen，LIU Zhong-qiu，CAI De-yang，LI Jin-lian，ZHONG Hai-feng，LIN Jun，WU Qun-ying
（Guilin Medical University，College of Biotechnology，Guilin 541100，Guangxi，China）
Abstract： The research aimed to study the effect of mouthwash on the genetic damage of root tip cells of garlic， different concentrations of mouthwash were used separately to treat the root tip of garlic for 8， 12 and 24 h. The results showed that mouthwash induced the aberration of chromosomal and nuclear， the higher concentrations of mouthwash induced higher frequency of micronucleus rates（P<0.05）. while he number of mitosis cell of divisions and mitotic index decreased（P<0.05）， which were negatively correlated with the treatment time and dose of mouthwash. These results suggested mouthwash caused the genetic damage.
Key words： mouthwash; micronucleus rate; micronucleus index; mitotic index
目前，人们生活水平提高的同时，各种产品与日俱增，化学产品的污染和危害也成为社会广泛关注的问题[1，2]。一次性漱口水由于使用方便、易携带，赢得了广大群众的青睐。目前市面上常见的漱口水成分为桉油叶素、乙醇、百里香酚、水杨酸甲酯、薄荷脑等。杜永华等[3]发现一定剂量的1，8-桉叶油素对大鼠体质量、生化指标和血常规指标均有不同程度的影响，会诱发小鼠感染性损伤和肝肾损伤;闻健琼[4]研究表明，某品牌漱口水中含26.9%的乙醇成分，禁用于难以忍耐高浓度乙醇的患者。长期使用漱口水是否对细胞产生遗传损伤作用，目前尚未见相关报道。
植物微核技术（Micronucleus test，MNT）有操作简便、时间短、试验结果可靠、较强的实用性[5]等特点，可直观反映污染物对生物遗传物质影响[6]，广泛应用于遗传毒性检测、安全性评估和遗传损伤的监测[7]。目前观察有丝分裂常用的材料为蚕豆，但蚕豆只有一根主根，侧根生长不齐，生根需10 d时间;大蒜室温下3～5 d即可生根，与蚕豆相比，育根更加快捷，每个蒜瓣可以萌发出数条或数十条不定根，根获得量更大，可以消除因不同个体进行处理时，出现的遗传差异，是研究植物有丝分裂的优良材料[8-11]。本试验选用大蒜根尖为材料，采用MNT检测漱口水对大蒜根尖细胞遗传损伤的影响。
1 材料与方法
1.1 材料
紫皮大蒜（购于桂林市南城百货）。某品牌漱口水（购于桂林市沃尔玛超市），蒸馏水，无水乙醇、浓盐酸（购于陇化工股份有限公司），改良苯酚品红（购于Solarbio公司）。
1.2 方法
大蒜剥皮，置于蒸馏水中水培发根（25 ℃），待根長至1～3 cm，选择根尖生长情况优良的蒜瓣，蒸馏水为对照（Control），40%、80%、100% 4个浓度的漱口水溶液分别处理8、12和24 h。截取根尖，卡诺固定液固定24 h后转入70%乙醇中，4 ℃环境保存。
1.3 制片与镜检
蒸馏水漂洗3次，放入盛有1 mol/L HCl的小烧杯中，置于 60 ℃恒温水浴锅中解离8～10 min，待根尖发白变软后取出，水洗后置于载玻片上，解剖刀截取根尖长约0.5 cm，改良苯酚品红染色8～10 min，压片，镜检。
1.4 数据处理
每个处理组随机选取3张片，每个根尖统计1 000个细胞，共统计3 000个细胞，记录染色体畸变状况、细胞分裂数、微核数，计算微核率、微核指数、有丝分裂指数。
微核率（MCN）=（观察细胞中有微核的细胞数/总观察的细胞数）×1 000‰;
微核指数=处理组微核细胞数/对照组微核细胞数×100%;
有丝分裂指数（MI）=处理组有丝分裂细胞数/处理组细胞总数×100%。
采用SPSS 20.0进行数据分析，对试验组和对照组进行组间P值检验和组内多重比较。当P<0.05，表明差异具有统计学意义;P<0.01，差异显著。微核指数平均值在0～0.5表示基本无损伤，1.5～2.0为轻度损伤，2.0～3.5为中度损伤，3.5以上表现为重度损伤[12，13]。
2 结果与分析
2.1 不同浓度漱口水对大蒜根尖细胞有丝分裂过程染色体畸变的影响
分别用不同浓度的漱口水溶液处理大蒜根尖，检测根尖细胞有丝分裂情况，与对照组相比，漱口水处理组诱导产生多种类型的染色体畸变，结果见图1，主要表现为微核（图1A）、染色体滞后（图1B）、染色体桥（图1C、图1D）、染色体断片（图1E）、染色体多极化（图1F）等染色体畸变的现象。
2.2 不同浓度漱口水对大蒜根尖细胞微核率的影响
用蒸馏水和不同浓度漱口水培养大蒜根尖，结果表明，处理时间相同时，漱口水浓度增加，微核发生率升高（表1）。与对照组相比，80%和100%漱口水处理组微核发生率均具有统计学意义（P<0.05）;而40%漱口水处理大蒜根尖8 h时，微核发生率不具有统计学意义（P>0.05），延长时间至12 h和24 h时，结果具有统计学意义（P<0.05），表明低浓度、短时间处理对根尖细胞的遗传损伤作用不大。同一浓度漱口水，作用时间越长，微核率越高，其中100%浓度漱口水处理大蒜根尖8、12和24 h时，微核率分别为6.50‰、6.90‰和7.70‰，差异具有统计学意义。
2.3 不同浓度漱口水对大蒜根尖有丝分裂指数的影响
分裂期细胞数目越多，表明细胞分裂活动越旺盛，其有丝分裂指数越大。本试验采用不同浓度漱口水分别处理大蒜根尖8、12和24 h。结果表明，漱口水处理组降低细胞有丝分裂指数，降幅与漱口水浓度和处理时间呈负相关（表2）。从表2可见，对照组有丝分裂指数为62.72%，试验组分裂指数均小于10%，结果具有统计学意义（P<0.05）。
3 討论
植物微核技术是检测污染物遗传毒性常用的试验方法[14]，有丝分裂指数越大，表示根尖细胞分裂越旺盛，分裂细胞越多[15]。本试验研究表明，漱口水抑制根尖细胞有丝分裂，诱导大蒜根尖细胞产生多种类型的染色体畸变，导致细胞分裂数目减少，对根尖的生长分化产生不利影响。与对照组相比，漱口水浓度越高，处理时间越长，微核发生率越高，40%漱口水处理组，微核数量较少，只有处理时间为24 h时，微核发生率具有统计学意义，表明低浓度漱口水对大蒜根尖遗传损伤作用不大;80%和100%浓度的漱口水溶液处理，微核指数增大，表明高浓度漱口水对大蒜根尖遗传损伤作用较为严重。漱口水作为目前市场上流行使用的口腔清洁剂，对保持口腔健康起到较好的作用。本试验初步探讨漱口水对大蒜根尖细胞的遗传损伤作用，为评价漱口水的安全性提供参考。
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