对照组）同时进行RF，抗CCP，AKA，IgG，C3、C4检测。 结果 RA组抗CCP、RF、AKA的阳性率均明显高于非RA组和对照组（P<0.05）；RA组IgG水平较对照组明显升高（P<0.05）；RA组C3、C4水平与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 RA患者体内存在多种免疫功能紊乱，联合检测免疫学指标对疾病的诊断、治疗和预后有重要的意义。
[关键词] 免疫学指标；联合检测；类风湿关节炎
[中图分类号] R593.22 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）09（a）-0097-02
类风湿关节炎（rheumatoid arthritis， RA）是一种以关节滑膜炎为为特征的慢性全身性自身免疫性疾病。该病反复发作，可导致关节障碍、甚至残废。早期诊断和应用抗类风湿病变的药物有助于延缓病情的发展，故各国学者一直以来对该病的早期实验室诊断相当重视[1]。本研究将免疫学指标纳入到RA诊断中，以探讨其对RA诊断和鉴别诊断的价值。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2010年1月～2012年10月在本院就诊的RA患者120例，患者均符合美国风湿协会（ARA）在1987年重新修订的RA诊断标准，其中，男性49例，女性71例，年龄20～50岁，平均35.3岁；非RA组：130例非RA的自身免疫系统疾病患者，患者均符合各自疾病的最新国际诊断标准，其中，男性47例，女性83例，年龄23～54岁，平均37.2岁；自身免疫性溶血性贫血（AHA）17例、系统性红斑狼疮（SLE）37例、干燥综合征（SS）18例、系统性硬化病（PSS）11例、强直性脊柱炎（AS）29例、混合型结缔组织病（UCTD）4例、皮肌炎（DM）7例、结节性多动脉炎2例、多肌炎5例；正常对照组：随机抽取来本院体检的健康者60例，男性26例，女性34例，年龄25～52岁，平均（33.6±6.9）岁。
1.2 标本采集
所有入选者空腹采集肘静脉血3 ml，2 h内进行3000 r/min，离心20 min后，分离出血清，置入 -40℃冰箱保存，待检。
1.3 检测方法
1.3.1 类风湿因子（RF）的检测 RF测定用美国Beckman公司生产的Array-360检测系统及配套试剂，采用免疫散射浊度法定量检测RF，>20 U/ml判断为为阳性。
1.3.2 抗环瓜氨酸多肽抗体（抗CCP）的检测 用酶联免疫吸附法（ELLSA）检测IgG型抗CCP，采用德国欧蒙公司提供的试剂盒，操作过程按说明书，>5 U/ml为阳性。
1.3.3 抗角蛋白抗体（AKA）的检测 采用间接免疫荧光法检测，试剂盒购自德国欧蒙实验诊断有限公司，血清1∶10稀释，在荧光显微镜下观察到角质层呈典型的层板或线状荧光模式为阳性。
1.3.4 免疫球蛋白G（IgG）、C3、C4的检测 用速率散射比浊法 ，仪器：雅培生化分析仪（宁波美康）。
以上检测指标均严格按照说明书的操作标准进行操作。
1.4 统计学方法
应用SPSS 12.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验，计数资料用百分率表示，采用χ2检验， 以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
RA组IgG水平较对照组明显升高（P<0.05），C3、C4水平与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）；RA组IgG，C3，C4与非RA组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。RA组抗CCP、RF、AKA的阳性率明显高于非RA组和对照组（P<0.05）（表1）。
3 讨论
RA是临床上较常见的一种致畸性自身免疫性疾病。目前，RA诊断中仍以传统的血清学指标即RF结合临床表现及X线改变作为诊断依据[2]，RF虽然敏感性高，但由于RF在许多结缔组织病、慢性感染性疾病均可呈阳性，在正常人群中（特别是老年人）也存在一定的阳性率，所以特异性较差[3]，虽然临床症状和X线改变较为直观，但出现临床症状和X线改变时已过了临床治疗的最佳时期，因此如何早期特异地诊断RA是治疗RA的关键，也是临床研究的热点。如果能对RA作出明确诊断并尽早进行治疗，就能控制疾病的发展，防止骨和关节发生不可逆的变化，从而获得较好的疗效、改善预后、改善患者的生活质量。
由于RF敏感性高，但特异性较差，在其他自身免疫性疾病中，RF仍可为阳性，易造成误诊、漏诊，故仅凭单项RF诊断RA有一定的局限性。1979 年Young[4]以鼠食道为底物，用免疫荧光法检测AKA，发现它是一种不同于RF的IgG型抗体，对诊断RA具有很高的特异性。2000年国外首次报道抗核周因子抗体（APF）、AKA、抗中间丝抗体（AFA）的共同抗原决定簇环瓜氨酸肽（CCP）可经人工合成，用ELISA法检测，对诊断RA具有很高的特异性和敏感性[5-6]。近年研究发现抗CCP、AKA等均可在RA疾病早期出现，对诊断RA具有较高的特异性[7]，而RF可作为疾病损伤严重程度较好的指标。如何有效地应用已知的自身抗体进行检测以提高RA的诊断率，一些学者提出联合检测的思路[8-9]，有研究表明3种指标联合检测特异性可高达100%[10]，为早期诊断提供了有力的证据。
近年来，有研究表明体液免疫紊乱是RA发病的重要环节之一[11]。IgG是人体内重要的免疫抗体，其在体内的水平可以反映体液免疫的情况。本次研究结果显示，RA患者IgG水平与对照组比较明显升高，提示体液免疫参与了RA发病的过程。补体是一组存在于人和脊椎动物血清中具有酶样活性，不耐热的糖蛋白。近年来，补体分子作为非特异性免疫的主要成分，对特异性免疫的指导作用越来越受到人们的重视，补体缺陷常导致自身免疫性疾病的事实提示补体在维持免疫自稳中的重要作用，并且其在RA发病中也具有重要作用。本次研究中选取C3，C4作为检测指标，结果显示，RA 患者血清中C3，C4降低。因此，检测RA患者血清中IgG和C3，C4水平有助于研究RA发生、发展的机制，为临床诊断提供一定的实验室参考依据。
综上所述，RF、抗CCP、AKA、IgG、C3、C4可作为RA诊断的实验室指标，各指标各有优缺点，可以互为补充，联合检测可提高诊断RA的特异性，减少漏诊的发生，有助于为RA的临床治疗提供诊断依据，对RA的早期诊断和尽早治疗、改善预后将更有意义，所以上述6项指标应该在RA的诊断中联合应用。
[参考文献]
[1] 吴冬梅，童宗武，朱桂华，等.2010年欧洲风湿病联盟和美国风湿病学会类风湿关节炎分类标准的敏感性和特异性研究[J].中国全科医学，2012，15（14）：1545-1548.
[2] 沈安红.抗体检测在类风湿性关节炎诊断中的应用[J].医学信息，2010，4（23）：226.
[3] 曹瑜，陈明，蔡美珠，等.抗环瓜氨酸肽抗体和类风湿因子联合测定对类风湿关节炎的诊断价值[J].中国临床医学，2006，6（13）：1023.
[4] Young BJ，Mallya RK，Leslie RD，et al.Anti-keratin antibodies in rheumatoid arthritis[J].Br Med J，1979，2（6182）：97-99.
[5] Schellekens GA，Visser H， de Jong BA，et al.The diagnostic properties of rheumatoid arthritis antibodies recognizing a cyclic citrullinated peptide[J].Arthritis Rheum，2000，43（1）：155-163.
[6] Kroot EJ，de Jong BA，van Leeuwen MA， et al.The prognostic value of anti-cylic citrullinated peptide antibody in patients with recent-onset rheumatoid arthritis[J].Arthritis Rheum，2000，43（8）：1831-1835.
[7] 张蜀兰，李永哲，佟大伟.抗丝集蛋白抗体谱检测在类风湿性关节炎诊断中的临床价值[J].中国医学检验杂志，2005，6（3）：177-179.
[8] 李鸿斌，李小峰，甘晓丹，等.抗核周因子等四种抗体联合检测在早期类风湿性关节炎诊断中的意义[J].中华医学杂志，2000，80（1）：20-24.
[9] 彭晓冬，李立新，白杨娟，等.抗-CCP抗体、AKA及RF对类风湿性关节炎的诊断价值[J].四川大学学报，2006，37（2）：317-318.
[10] 蔺昕，宗杨勇，吕连峥.3种指标联合检测在类风湿关节炎诊断中的应用[J].检验医学与临床，2010，7（17）：1852-1853.
[11] 王文杰.多种自身抗体联合检测在类风湿性关节炎诊断中的应用[J].中华医学护理杂志，2010，20（4）：15-16.
（收稿日期：2013-04-25 本文编辑：许俊琴）